Т-лимфоциты киллеры (СD8+)

Т-лимфоциты киллеры (СD8+)

Итак, прежде всего, охарактеризуем CD8+ лимфоциты, выполняющие цитотоксические функции. Эти лимфоциты реализуют специфические клеточные реакции иммунитета: участвуют в механизмах отторжения аллотрансплантатов, реакциях аутоиммунитета, разрушают вирусинфицированные и опухолевые клетки.

Таким образом, Т-лимфоцит-киллер – основная эффекторная клетка клеточно-опосре дован-ного иммунитета, которая осуществляет лизис мишеней, обеспечивает генетическое постоянство внутренней среды организма.

Напомним, что в периферической крови и во вторичных лимфоидных органах Т-киллер на-ходится в состоянии покоя, – так называемая зрелая покоящаяся CD8+ клетка. Для того, чтобы произошла ее дифференцировка в зрелый Т-киллер, способный осуществлять киллинговый эффект, требуется несколько условий. Во-первых, нужно распознать чужеродный антиген; во-вторых, требуется время для создания клона специфических Т-киллеров, способных оказать ощутимый эффект. Для распознавания чужеродного антигена у CD8+ клетки, так же, как и у CD4+, есть Т-клеточный антигенраспознающий рецептор в комплексе с СDЗ-структурой. Точно так же, как и в случае с CD4+ клеткой (хелпером), CD8+ клетка (киллер) распознает не весь чужеродный антиген, а его блоки, так называемые доминантные пептиды, которые находятся на поверхности антигенпредставляющей клетки в сочетании с молекулами ГКГ. Однако, существует принципиальное различие в “работе” CD4+ клеток (хелперов) и CD8+ клеток (киллеров) при распознавании антигенов.

Так, CD4+ клетки (Т-лимфоциты-хелперы) могут распознать чужеродный пептид только в том случае, если он находится в сочетании (презентируется) с молекулами гистосовместимости класса II на поверхности антигенпрезен-тирующей клетки. В норме в организме таких клеток немного – это моноциты-макрофаги, В-лимфоциты и Дендритные клетки, обладающие способностью поглощать попавший в организм чужеродный материал, перерабатывать (процессировать) его с помощью целого ряда ферментов, разрезая антиген на блоки – пептиды, а затем транспортировать и х из глубины к лет ки на ее поверхность в сочетании с молек улами гистосовместимости класса II. Только после этого CD4+ клетка (хелпер) сможет распознать эти чужеродные, так называемые экзогенные, пептиды; это повлечет за собой активацию и пролиферацию CD4+ клеток с последующей их дифференцировкой на Т-хелперы 1-го и 2-го типа, о чем уже упоминалось.

Совсем иначе осуществляется распознавание пептидов CD8+ клеткой (Т-лимфоцитом-киллером). Основное отличие состоит в том, что пептид подается для распознавания (презентируется) в составе молекулы гистосовместимости класса I, а не класса II, как для хелперов. Это очень важный момент, поскольку молекулы гистосовместимости класса 1 присутствуют на всех ядерных клетках организма. Исходя из этого, все изменения гомеостаза организма, происходящие на внутриклеточном уровне, будут отражаться на мембране клетки в виде так называемых эндогенных пептидов, находящихся в составе молекул гистосовместимости класса I. То или иное изменение гомеостаза клетки превращает ее в чужеродную (например, мутация, поражение вирусом и др.), CD8+ клетка (киллер) распознает это по пептидам, проактивируется и разрушит такую измененную клетку. Таким образом, CD8+ Т-клетка (киллер), распознающая эндогенные пептиды в составе молекул гистосовместимости класса 1, которые имеются на мембране всех ядерных клеток организма, выполняет своеобразную цензорную функцию, позволяющую иммунной системе осуществлять контроль за постоянством внутренней среды организма. Следует добавить, что с помощью молекул гистосовместимости класса I презентируются также экзогенные пептиды, “сделанные” из внутриклеточных паразитов, например, вирусов.

Существует еще одно условие, необходимое для созревания цито-токсических CD8+ клеток: после распознавания чужеродного пептида эти клетки должны получить дополнительный сигнал от CD4+ клеток (хелперов), который позволит им делиться (пролиферировать), в результате чего из одной клетки образуется целый клон (группа) клеток, обладающих одной специфичностью и достаточным потенциалом для реализации клеточного иммунного ответа. Отсюда ясно, насколь¬ко важна способность клеток пролиферировать. Сигнал к пролиферации CD4+ клетка (хелпер) подает с помощью ИЛ-2, который она продуцирует: для восприятия этого сигнала на CD8+ клетке (киллере) есть рецептор к ИЛ-2. Более точная хронология событий состоит в следующем.

После поглощения антигена, активированный макрофаг среди прочего продуцирует ИЛ-1, одна из основных задач которого заключается в том, чтобы “заставить” Т-лимфоциты-хелперы продуцировать ИЛ-2. Одновременно под влиянием ИЛ-1 на поверхности лимфоцитов проявляется рецептор к ИЛ-2. В том случае, если иммунный ответ пойдет по клеточному пути, то Т-лимфоцит-киллер после распознавания чужеродного пептида получит дополнительный сигнал в виде ИЛ-2 и начнет пролиферировать.

Рассмотрим цитотоксическую реакцию на примере разрушения вирусинфицированных клеток . При появлении в организме вирусинфицированных клеток, CD8+ Т-лимфоциты (киллеры) распознают вирусный антиген, который представляется им совместно с молекулой ГКГ класса I на поверхности этой клетки. В свою очередь CD4+ Т-лимфоцит (хелпер) распознает вирусный антиген, который представляется ему с молекулой ГКГ класса II антигенпредставляющей клетки (АПК), например макрофага. Одновременно макрофаг продуцирует ИЛ-1, что запускает интерлейкиновый каскад. Хелперный Т-лимфоцит секретирует ИЛ-2, который позволяет предшественнику CD8+ цитотоксической Т-клетки пролиферировать, что приводит к обра¬зованию клона вирусоспецифических клеток-киллеров. В последующем эти цитотоксические Т-клетки разрушают вирусинфицированные клетки. Одновременно с клеточным ответом на вирус развивается и гуморальный ответ, заканчивающийся продукцией специфических антител. Здесь также очень важна роль CD4+ клеток (хелперов). Более подробно об этом будет сказано ниже.

Механизм цитолитического действия Т-лимфоцитов-киллеров в настоящее время представляется следующим образом: на первом этапе (программирования лизиса) между клеткой-эффектором (киллером) и клеткой-мишенью устанавливается специфический контакт; на втором этапе (летального удара) клетки-киллеры оказывают литическое действие на клетки-мишени; на третьем (заключительном) этапе осуществляется непосредственное повреждение клеток-мишеней. В цитотоксической реакции разрушаются только клетки-мишени: киллерные клетки после летального удара отделяются от клеток-мишеней. Таким образом, если быть точным, Т-киллеры только запускают цитолитическую реакцию, но не участвуют в непосредственном разрушении клеток-мишеней. Сама киллерная клетка может участвовать в последовательном разрушении нескольких клеток-мишеней, оставаясь при этом неповрежденной и функционально активной.Убитые вирусные вакцины не активируют CD8+ Т-клетки (киллеры) потому, что в этом слу-чае вирус не реплицируется в пораженной клетке, и, следовательно, вирусные эпитопы (пепти-ды) не презентируются в ассоциации с молекулами ГКГ класса I и не распознаются CD8+ клетками.

Следует учитывать, что активирование Т-клетки не является простой функцией “включения-выключения”. Связывание эпитопов (пептидов) Т-клеточным распознающим рецептором может приводить либо к полной активации Т-клеток, либо к частичной, либо, наконец, не вызывать активацию. Все это зависит от того, на каком этапе прерываются сигналы трансдукции, идущие внутрь клетки, т. е. насколько данный пептидэпитоп может индуцировать этот сигнал трасдукции.

Для большей стабилизации взаимодействующих между собой Т-лимфоцитов и антигенпрезентирующих клеток в иммунном ответе необходимы также так называемые ко-стимупирующие сигналы. Они состоят в следующем: на Т-лимфоцитах имеется белок LFA-1, который связывается с соответствующим белком 1САМ-1 на антигенпрезентирующей клетке. Кроме того, на поверхности Т-лимфоцитов есть белок CD28, который соединяется с белком CD80 на антигенпрезентирующих клетках. Для полной активации Т-лимфоцитов связь CD28 и CD80 крайне необходима. Если этого контакта не будет, то наступит анергия или апоптоз Т-лимфоцита. Сегодня описаны и другие пары костимуляционных молекул (например, CD40-CD40 лиганд, CD86-CD154 и др.), взаимодействия которых крайне важно в регуляции иммунного ответа на уровне клетки.

Оценка показателей клеточного иммунитета

Первым исследованием всегда является подсчет лейкоцитарной формулы (см. главу «Гематологические исследования»). Оцениваются как относительные, так и абсолютные значения количества клеток периферической крови.

Определение основных популяций (Т-клетки, В-клетки, натуральные киллеры) и субпопуляций Т-лимфоцитов (Т-хелперы, Т-ЦТЛ). Для первичного исследования иммунного статуса и выявления выраженных нарушений иммунной системы ВОЗ рекомендовано определение CD3, CD4, CD8, CD19, CD16+56, соотношение CD4/CD8. Исследование позволяет определить относительное и абсолютное количество основных популяций лимфоцитов: Т-клетки – CD3, В-клетки – CD19, натуральные киллеры (NK) – CD3- CD16++56+, субпопуляции Т лимфоцитов (Т-хелперы CD3+ CD4+, Т-цитотоксические CD3+ CD8+ и их соотношение).

Метод исследования

Иммунофенотипирование лимфоцитов проводится c использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным ангинам на клетках иммунной системы, методом проточной лазерной цитофлуорометрии на проточных цитофлуориметрах.

Выбор зоны анализа лимфоцитов производится по дополнительному маркеру CD45, который представлен на поверхности всех лейкоцитов.

Условия взятия и хранения образцов

Венозная кровь, взятая из локтевой вены, утром, строго натощак, в вакуумную систему до указанной на пробирке метки. В качестве антикоагулянта используется К2ЭДТА. После взятия пробирку с образцом медленно переворачивают 8-10 раз для перемешивония крови с антикоагулянтом. Хранение и транспортировка строго при 18–23°С в вертикальном положении не более 24 ч.

Невыполнение этих условий приводит к некорректным результатам.

Интерпретация результатов

Т-лимфоциты (CD3+ клетки). Повышенное количество свидетельствует о гиперактивности иммунитета, наблюдается при острых и хронических лимфолейкозах. Увеличение относительного показателя встречается при некоторых вырусных и бактериальных инфекциях в начале заболевания, обострениях хронических заболеваний.

Читайте также  Рецепт лукового супа для похудения с сельдереем

Снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов свидетельствует о недостаточности клеточного иммунитета, а именно о недостаточности клеточно-эффекторного звена иммунитета. Выявляется при воспалениях разнообразной этиологии, злокачественных новообразованиях, после травмы, операций, инфаркта, при курении, приеме цитостатиков. Повышение их числа в динамике заболевания – клинически благоприятный признак.

В-лимфоциты (CD19+ клетки) Снижение наблюдается при физиологических и врожденных гипогаммаглобулинемиях и агаммаглобулинемиях, при новообразованиях иммунной системы, лечении иммунодепрессантами, острой вирусной и хронической бактериальной инфекциях, состоянии после удаления селезенки.

Увеличение отмечается при аутоиммунных заболеваниях, хронических заболеваниях печени, циррозе, муковисцедозе, бронхиальной астме, паразитарных и грибковых инфекциях. Характерно в период реконвалесценции после перенесенных острых и хронических вирусных и бактериальных инфекций. Выраженное увеличение наблюдается при хроническом В-лимфолейкозе.

NK-лимфоциты с фенотипом CD3-CD16++56+ Натуральные киллеры (NK-клетки) – популяция больших гранулярных лимфоцитов. Они способны лизировать клетки-мишени, инфицированные вирусами и другими внутриклеточными антигенами, опухолевые клетки, а также другие клетки аллогенного и ксеногенного происхождения.

Увеличение количества NK-клеток связано с активацией антитрансплантационного иммунитета, в некоторых случаях отмечается при бронхиальной астме, встречается при вирусных заболеваниях, повышается при злокачественных новообразованиях и лейкозах, в периоде реконвалесценции.

Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах, паразитарных инфекциях, аутоиммунных заболеваниях, облучении, лечении цитостатиками и кортикостероидами, стрессе, дефиците цинка.

Т-лимфоциты хелперы с фенотипом CD3+CD4+ Увеличение абсолютного и относительного количества наблюдается при аутоиммунных заболеваниях, может быть при аллергических реакциях, некоторых инфекционных заболеваниях. Это увеличение свидетельствует о стимуляции иммунной системы на антиген и служит подтверждением гиперреактивных синдромов.

Снижение абсолютного и относительного количества Т-клеток свидетельствует о гипореактивном синдроме с нарушением регуляторного звена иммунитета, является патогномичным признаком для ВИЧ-инфекции; встречается при хронических заболеваниях (бронхитах, пневмониях и т.д.), солидных опухолях.

Т-цитотоксические лимфоциты с фенотипом CD3+ CD8+ Повышение выявляется практически при всех хронических инфекциях, вирусных, бактериальных, протозойных инфекциях. Является характерным для ВИЧ-инфекции. Снижение наблюдается при вирусных гепатитах, герпесе, аутоиммунных заболеваниях.

Соотношение CD4+/CD8+ Исследование соотношения CD4+/CD8+ (CD3, CD4, CD8, CD4/CD8) рекомендовано только для мониторинга ВИЧ-инфекции и контроля эффективности АРВ терапии. Позволяет определить абсолютное и относительное количество Т-лимфоцитов, субпопуляций Т-хелперов, ЦТЛ и их соотношение.

Диапазон значений – 1,2–2,6. Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах (синдром Ди-Джоржи, Незелофа, Вискотта-Олдрича), при вирусных и бактериальных инфекциях, хронических процессах, воздействии радиации и токсических химических веществ, множественной миеломе, стрессе, снижается с возрастом, при эндокринных заболеваниях, солидных опухолях. Является патогномичным признаком для ВИЧ-инфекции (менее 0,7).

Увеличение значения более 3 – при аутоиммунных заболеваниях, остром Т-лимфобластном лейкозе, тимоме, хроническом Т-лейкозе.

Изменение соотношения может быть связано с количеством хелперов и ЦТЛ у данного пациента. Например, снижение количества CD4+ Т-клеток при острой пневмонии в начале заболевания ведет к снижению индекса, а ЦТЛ при этом могут не измениться.

Для дополнительного исследования и выявления изменений иммунной системы при патологиях требующих оценки наличия острого или хронического воспалительного процесса и степени его активности, рекомендуется включать подсчет количества активированных Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+HLA-DR+ и ТNK–клеток с фенотипом CD3+CD16++56+.

Т-активированные лимфоциты с фенотипом CD3+HLA-DR+ Маркер поздней активации, показатель гиперреактивности иммунитета. По экспрессии данного маркера можно судить о выраженности и силе иммунного ответа. Появляется на Т-лимфоцитах после 3-го дня острого заболевания. При благоприятном течении заболевания снижается до нормы. Увеличение экспрессии на Т-лимфоцитах может быть при многих заболеваниях, связанных с хроническим воспалением. Отмечено его повышение у пациентов с гепатитом С, пневмониями, ВИЧ-инфекцией, солидными опухолями, аутоиммунными заболеваниями.

ТNK-лимфоциты с фенотипом CD3+CD16++CD56+ Т-лимфоциты, несущие на своей поверхности маркеры CD16++ CD 56+. Эти клетки имеют свойства как Т-, так и NK-клеток. Исследование рекомендовано как дополнительный маркер при острых и хронических заболеваниях.

Снижение их в периферической крови может наблюдаться при различных органоспецифических заболеваниях и системных аутоиммунных процессах. Увеличение отмечено при воспалительных заболеваниях разной этиологии, опухолевых процессах.

Исследование ранних и поздних маркеров активации Т-лимфоцитов (CD3+CD25+, CD3-CD56+, CD95, CD8+CD38+) дополнительно назначают для оценки изменений ИС при острых и хронических заболеваниях, для диагностики, прогноза, мониторинга течения заболевания и проводимой терапии.

Т-активированные лимфоциты с фенотипом CD3+CD25+, рецeптор к ИЛ2 CD25+ – маркер ранней активации. О функциональном состоянии Т-лимфоцитов (CD3+) свидетельствует количество экспрессирующих рецепторов к ИЛ2 (CD25+). При гиперактивных синдромах количество этих клеток возрастает (острые и хронические лимфолейкозы, тимома, отторжение трансплантата), кроме того, повышение их может свидетельствовать о ранней стадии воспалительного процесса. В периферической крови их можно выявить в первые три дня болезни. Снижение числа этих клеток может наблюдаться при врожденных иммунодефицитах, аутоиммунных процессах, ВИЧ-инфекции, грибковых и бактериальных инфекциях, ионизирующей радиации, старении, отравлении тяжелыми металлами.

Т-цитотоксические лимфоциты с фенотипом CD8+CD38+ Присутствие CD38+ на ЦТЛ лимфоцитах отмечено у пациентов с разными заболеваниями. Информативный показатель при ВИЧ-инфекции, ожоговой болезни. Увеличение числа ЦТЛ с фенотипом CD8+CD38+ наблюдается при хронических воспалительных процессах, онкологических и некоторых эндокринных заболеваниях. При проведении терапии показатель снижается.

Субпопуляция натуральных киллеров с фенотипом CD3- CD56+ Молекула CD56 – адгезивная молекула, широко представленная в нервной ткани. Кроме натуральных киллеров, экспрессируется на многих типах клеток, в том число на Т-лимфоцитах.

Увеличение данного показателя свидетельствуют о расширении активности специфического клона клеток киллеров, которые имеют меньшую цитолитическую активность, чем NK-клетки с фенотипом CD3- CD16+. Количество этой популяции возрастает при гематологических опухолях (ЕК-клеточная или Т-клеточная лимфома, плазмоклеточная миелома, апластическая крупноклеточная лимфома), хронических заболеваниях, некоторых вырусных инфекциях.

Снижение отмечается при первичных иммунодефицитах, вирусных инфекциях, системных хронических заболеваниях, стрессе, лечении цитостатиками и кортикостероидами.

Рецептор CD95+ – один из рецепторов апоптоза. Апоптоз – сложный биологический процесс, необходимый для удаления из организма поврежденных, старых и инфицированных клеток. Рецептор CD95 экспрессируется на всех клетках иммунной системы. Он играет важную роль в контроле функционирования иммунной системы, так как является одним из рецепторов апоптоза. Его экспрессия на клетках определяет готовность клеток к апоптозу.

Снижение доли CD95+-лимфоцитов в крови пациентов свидетельствует о нарушении эффективности последнего этапа выбраковки дефектных и инфицированных собственных клеток, что может привести к рецидиву заболевания, хронизации патологического процесса, развитию аутоиммунных заболеваний и повышению вероятности опухолевой трансформации (к примеру, рака шейки матки при папилломотозной инфекции). Определение экспрессии CD95 имеет прогностическое значение при миело- и лимфопролифератиных заболеваниях.

Повышение интенсивности апоптоза наблюдается при вирусных заболеваниях, септических состояниях, при употреблении наркотических средств.

Активированные лимфоциты CD3+CDHLA-DR+, CD8+CD38+, CD3+CD25+, CD95. Тест отражает функциональное состояние Т-лимфоцитов и рекомендован для контроля за течением заболевания и контроля иммунотерапии при воспалительных заболеваниях разной этиологии.

Иммунная система Часть 8 Анализы

Иммунная система Часть 8 Анализы

Помимо поражения вирусом иммунодефицита человека, вторичный иммунодефицит развивается после объемных оперативных вмешательств, обширных, тяжелых инфекций, на фоне терапии иммуноподавляющими или сильными противовоспалительными препаратами.

Исследования иммунитета помогают в оценке активности и стадии воспалительного, инфекционного и аллергического иммунного ответов, эффективности проводимой терапии. С этой целью они проводятся неоднократно.

Клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой

Клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой позволяет выявить множество заболеваний. Он отражает состояние гемопоэза – созревания и роста клеток крови в костном мозге. О состоянии иммунной системы говорят уровни белых клеток крови – лейкоцитов и лейкоцитарная формула. Наблюдение за лейкоцитарной формулой в динамике заболевания позволит выявить осложнения, распространение инфекции по организму, реакцию на лечение.

При бактериальных инфекциях можно увидеть повышение лейкоцитов и нейтрофилов с появлением их молодых форм в крови.

При вирусных инфекциях, наоборот, лейкоциты снижаются, а в лейкоцитарной формуле преобладают лимфоциты.

Преобладание тех или иных популяций в лейкоцитарной формуле помогает в диагностике причины воспаления. Например, при определенных инфекциях (например, инфекционный мононуклеоз) нарастают измененные моноциты, а при аллергических и паразитарных заболеваниях – эозинофилы.

Наличие совсем юных клеток (бластов) в крови признак чрезмерной активации костного мозга, а низкий уровень лейкоцитов и нейтрофилов без воспаления – его угнетения.

Лимфоциты, иммунофенотипирование

Выделяют разные популяции лимфоцитов, которые играют ключевую роль в направлении иммунного ответа – клеточный или гуморальный. Определение иммунного фенотипа лимфоцита возможно в специальном исследовании методом проточной цитофлюориметрии. Фенотип лимфоцитов зависит от особых рецепторов на их поверхности – кластеров дифференцировки CD. Наличие того или иного рецептора свидетельствует о принадлежности клетки к определенной популяции лимфоцитов.

Читайте также  Как лечить позвоночник в домашних условиях

Т-лимфоциты (CD3+) общие и их подтипы:

Т- клетки-киллеры (CD3+CD16+CD56+)

Естественные клетки-киллеры (CD3-CD16+CD56+)

Лимфоциты с маркером HLA-DR+

Иммунорегуляторный индекс (Т-хелперы/Т-цитотоксические)

Дополнительно исследуют другие CD маркеры лимфоцитов для определения их активности.

Оценка результата возможна только в совокупности с данными клинической картины и иммуномодулирующей терапии. Иммунофенотипирование лимфоцитов, как правило, проводят в динамике. Так, при ВИЧ-инфекции, поражающей Т-хелперы, снижение уровня CD3+CD4+ — клеток и иммунорегуляторного индекса (CD3+CD4+/CD3+CD8+) имеет плохой прогностический прогноз по течению заболевания.

Циркулирующие иммунные комплексы и система комплемента

Антигены связываются специфическими антителами с образованием иммунных комплексов. Последние активируют комплемент, способствуют удалению чужеродных антигенов. Если их слишком много циркулирует в крови, они откладываются в тканях, например почек, кожи, легких. Высокое содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) наблюдается при аутоиммунных, хронических воспалительных и инфекционных заболеваниях. С другой стороны, определение ЦИК в крови неспецифично, не отражает ни причину их нарастания, ни непосредственное влияние на органы.

Снижение уровней ЦИК на фоне лечения говорит о затихании воспалительного процесса и эффективности терапии.

Наиболее распространенными анализами на систему комплемента являются определение ключевых С3 и С4 компонентов. Показаниями для исследования – повторяющие инфекции, ревматические и аутоиммунные заболевания для выявления врожденных дефицитов комплемента, утяжеляющих течение этих болезней.

Исследуют уровни ЦИК, С3-компонент и С4-компонент комплемента.

Иммуноглобулины A, M, G, E

Общие иммуноглобулины – показатели гуморального иммунного ответа. Уровни IgM возрастают в острый период заболевания и при обострении хронической инфекции, IgG – в процессе выздоровления, IgA – в острый период заболевания, сохраняясь дольше IgM, отражают затяжное течение и поражение слизистых оболочек. Повышенные уровни IgE свидетельствуют об аллергическом воспалении.

Общие иммуноглобулины не объясняют причину инфекции, поэтому целесообразно смотреть специфические антитела к конкретным возбудителям. Основные показания для определения общих антител – это подозрение на врожденный иммунодефицит, связанный с гуморальным иммунитетом.

Интерфероновый статус и Интерлейкины

Исследования Интерфероновый статус, Интерлейкин-1бета, Интерлейкин-6, Интерлейкин-8, Интерлейкин-10, Фактор некроза опухоли-альфа и другие определяют уровни цитокинов – специфических маркеров иммунного ответа. Помогают в определении стадии заболевания, врожденных дефектов, онкологических заболеваний, активности воспалительного процесса и осложнений. Как правило, требуют динамического контроля для помощи в оценке клинической ситуации и эффективности лечения.

Фагоцитарная активность

Фагоцитарной активностью обладают нейтрофилы, моноциты-макрофаги и другие клетки. Фагоцитоз – это способность поглощать и переваривать антигены, вплоть до целых клеток. Он определяет возможности врожденного иммунитета и необходим для формирования приобретенного иммунитета. Оценка фагоцитарной активности клеток крови трудоемка и сложна. Используют такие тесты как оценка фагоцитоза бактерий с флюоресцентной меткой, тест по восстановлению нитросинего тетразолия.

Фагоцитарная активность повышается при бактериальных, аутоиммунных, аллергических заболеваниях.

Ее снижение наблюдается при врожденных дефектах фагоцитарной системы, хронических инфекциях.

Иммунограмма – это общее название всех исследований иммунного статуса. И в разных лабораториях включают разное сочетание анализов в зависимости от цели обследования. Для оценки клеточного иммунитета применяют исследование иммунофенотипов лимфоцитов. Для оценки гуморального иммунитета – общие иммуноглобулины, при необходимости дополняя их ЦИК, комплементом и белками острой фазы. Для оценки врожденного иммунитета больше подходят определения цитокинов в крови, фагоцитарная активность.

Фенотипирование лимфоцитов (основные субпопуляции) — CD3, CD4, CD8, CD19, CD16, CD56

Описание Показания Подготовка Интерпретация

Описание исследования

Данный тест предназначен для иммунофенотипирования (оценки клеточного состава) лимфоцитов крови человека с целью определения его иммунного статуса – комплексного показателя работы иммунной системы. В качестве зондов используются моноклональные антитела, позволяющие охарактеризовать тип и функциональное состояние клеток по определенным наборам клеточных маркеров дифференциации (CD-антигенам).

Представители каждой субпопуляции лейкоцитов на разных стадиях содержат поверхностные и цитоплазматические антигены, характерные только для определенного вида и периода развития. Другими словами, CD-антигены – это антигены на поверхности клеток, по которым одни типы клеток отличаются от других. Существует стандартизация и дифференциация CD-антигенов, им присвоены определенные номера. Исследование проводится посредством метода проточной цитометрии. Он основан на выявлении фотометрических и флюоресцентных изменений отдельных клеток, проходящих вместе с жидкостью через луч монохоматического света. Метод позволяет с помощью флюоресцентно-меченых моноклональных антител посчитать количество лимфоцитов, относящихся к различным субтипам или находящихся на разных стадиях развития.

В рамках теста определяются следующие показатели:

  • Лимфоциты, абс.;
  • Т-лимфоциты (CD3+), %;
  • Т-лимфоциты (CD3+) кл/мкл;
  • Т-хелперы (CD3+CD4+), %;
  • Т-хелперы (CD3+CD4+) кл/мкл;
  • Т-цитотоксины (CD3+CD8+), %;
  • Т-цитотоксины (CD3+CD8+) кл/мкл;
  • Иммунорегуляторный индекс;
  • B-лимфоциты (CD19+), %;
  • B-лимфоциты (CD19+) кл/мкл;
  • EKK (CD3-CD16+CD56+), %;
  • EKK (CD3-CD16+CD56+) кл/мкл;
  • T-EK (CD3+CD16+CD56+), %.

Характеристика основных подтипов лейкоцитов, исследуемых в тесте:

1. Т-лимфоциты. Созревание клеток происходит в тимусе (вилочковой железе – важном органе иммунной системы, расположенном в верхнем отделе грудной клетки), откуда и пошло их название. В их задачу входит контроль работы В-лимфоцитов, отвечающих за гуморальный ответ иммунной системы – продукцию антител.

Т-хелперы – подвид Т-лимфоцитов. Поверхность данных клеток содержит структуры, способные распознавать антигены, обнаруженные вспомогательными клетками. Также они принимают участие в регуляции иммунного ответа посредством продукции цитокинов (небольших информационных молекул).

Роль цитотоксических Т-клеток состоит в распознавании фрагментов антигена на поверхности клетки-мишени, направлении своих гранул по направлению к обнаруженной мишени и высвобождении их содержимого при непосредственном контакте с ней.

2. В-лимфоциты. Вырабатываются данные клетки в лимфоидной системе (лимфоузлах и периферических органах). Поверхность этих клеток содержит антитела-рецепторы к антигенам. При контакте с антигенами происходит деление В-лимфоцитов и дифференциация их в вырабатывающие антитела плазматические клетки, которые обеспечивают гуморальный иммунитет.

3. ЕКК. Естественные (или натуральные) клетки-киллеры проявляют неиммунную цитотоксическую активность к неопластически измененным (опухолевым) клеткам-мишеням. ЕКК не относятся ни к моноцитам, ни к зрелымВ- или Т-лимфоцитам.

4. Т-ЕК проявляют естественную неиммунную киллерную активность и проявляют признаки Т-лимфоцитов.

Подготовка к исследованию

Кровь сдается строго натощак после воздержания от пищи в течение:

  • взрослые – 8-14 часов;
  • дети в возрасте 1-5 лет – 2-3 часа;
  • дети до года – 30-40 минут.

Можно пить негазированную воду. От употребления кофе, чая, соков следует воздержаться.

  • накануне обследования рекомендуется воздерживаться от физических и эмоциональных перегрузок;
  • за сутки до отбора пробы запрещено употребление алкогольных напитков, минимум за час – курение;
  • за сутки перед проведением обследования при наличии возможности и с разрешения лечащего врача исключить прием любых лекарственных препаратов;
  • непосредственно перед сдачей крови желательно 10-15 минут спокойно посидеть.

Забор крови не рекомендуется осуществлять после инструментального, ректального, мануального, рентгеновского, ультразвукового обследований, биопсии, кольпоскопии, гастроскопии, флюорографии, физиопроцедур, массажа, прочих диагностических и/или терапевтических манипуляций.

Показания к исследованию

а) при наличии затяжных, хронических, рецидивирующих инфекционных заболеваний:

  • часто повторяющихся ОРВИ;
  • хронических ЛОР-заболеваниях (отитах, гнойных синуситах, рецидивирующих воспалениях легких, бронхоплевропневмониях, периодических лимфаденитах);
  • бактериальных кожных и подкожных инфекциях(фурункулезе, флегмонах, пиодермиях, септических гранулемах, абсцессах, рецидивирующих гнойных воспалениях прямой кишки (парапроктитах));
  • инфекционных заболеваниях мочеполовой системы;
  • поражении грибком кожи и слизистых оболочек;
  • заражении паразитами;
  • рецидивирующем герпесе;
  • дисбактериозе;
  • гастроэнтеропатии, сопровождаемой хроническим поносом неясной этиологии;
  • присутствии длительное время без определенных причин субфебрильной температуры, лихорадки;
  • генерализированных инфекциях (например, гнойных менингитах, сепсисе);

b) при подозрении на приобретенный или обусловленный генетически иммунодефицит;

c) при аутоиммунных заболеваниях (характеризуются атакой иммунной системой на здоровые клетки собственного организма, что приводит к поражению здоровых тканей и развитию аутоиммунных воспалительных процессов):

  • рассеянном склерозе (образовании множественных рубцов на миелиновой оболочке нервных волокон головного и спинного мозга);
  • ревматоидном артрите (поражении суставов);
  • аутоиммунном тиреоидите (воспалении щитовидной железы);
  • неспецифическом язвенном колите (рецидивирующем воспалительном заболевании толстой кишки);
  • диффузных заболеваниях соединительной ткани (склеродермии, системной красной волчанке, дерматомиозите);

d) при аллергических заболеваниях:

  • атопическом дерматите;
  • нейродермите;
  • экземе с присутствием инфекции;
  • хроническом астматическом бронхите;
  • тяжелой атопической бронхиальной астме;
  • поллинозе (сезонной аллергической реакции на пыльцу);

e) при подозрении на СПИД;

f) при онкологических заболеваниях иммунной системы:

  • болезни Ходжкина (раке лимфатических узлов);
  • саркоме Капоши (многоочаговой сосудистой опухоли);
  • лимфоме (раке, поражающем лимфатическую систему организма);
  • остром и хроническом лимфолейкозе (болезни, характеризуемой прогрессирующим накоплением злокачественных В-лимфоцитов и поражающей на начальной стадии костный мозг, лимфоузлы, селезенку, периферическую кровь);

g) с целью обследования лиц перед и после трансплантации органов;

Читайте также  Отзывы суп для похудения из сельдерея лука капусты болг перца помидоров

h) перед сложными операциями;

i) при осложнениях в послеоперационный период;

j) для осуществления контроля лечения, проводимого с применением цитостатиков (противоопухолевых препаратов), иммунодепрессантов (препаратов, искусственно угнетающих иммунную систему), иммуномодуляторов (препаратов, способных менять в любую сторону ответ иммунной системы организма).

Интерпретация исследования

Абсолютное количество клеток различных подтипов лимфоцитов измеряется в клетках в микролитре (кл/мкл), относительное – в процентах (%).

Иммунорегуляторный индекс – относительный показатель, рассчитываемый как соотношение CD4+ клеток (Т-хелперов) к CD8+ клеткам (Т-цитотоксическим клеткам).

Причиной изменения в составе субпопуляций лимфоцитов могут быть различные патологии, в частности, осложнения после оперативного вмешательства, трансплантации органов, при иммунодефиците, инфекциях, онкологических, аллергических, аутоиммунных заболеваниях. В таблице ниже отражены клинические ситуации, которые могут стать причиной изменения субпопуляционного состава лимфоцитов:

Субпопуляция лимфоцитов

Показатель повышается:

Показатель понижается:

Т-цитотоксические лимфоциты (CD3+CD8+CD45+)

Естественные киллеры (CD3-CD56+CD45+), (CD3-CD16+CD45+)

Т-естественные киллеры (CD3+CD56+CD45+)

Диагностического значения не имеет.

Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже (референсные значения указаны в графе «Нормы интерпретации»):

Ф.И.О.: Иванов Иван Иванович Пол: м Дата рождения: хх.хх.хххх

Дата исследования: хх.хх.хххх

Исследование

Результат

Нормы интерпретации

Примечание

[287] Фенотипирование лимфоцитов (основные субпопуляции) — CD3, CD4, CD8, CD19, CD16, CD56

Дата выдачи (дата исследования): хх.хх.хххх

Субпопуляции лимфоцитов крови

Диагностическое направление

Оценка состояния иммуной системы

Общая характеристика

Данное исследование позволяет охарактеризовать лимфоцитарное звено клеточного иммунитета: процентное соотношение основных субпопуляций, их абсолютное количество в крови, а также уровень активации. Лимфоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. Физиологическая роль их может быть различной. Эти структуры являются мишенями при иммунофенотипировании лимфоцитов как антигенные маркёры различных субпопуляций, присутствие которых определяют с помощью меченых моноклональных антител. Поверхностные антигенные структуры на клетках, выявляемые моноклональными антителами, назвали кластерами дифференциации (CD, clusters of differentiation). Кластерам дифференциации в целях стандартизации присвоены определённые номера. Используя флюорохром-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определёнными CD, можно произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям. Это позволяет понять природу некоторых заболеваний, оценить состояние пациента, следить за течением и прогнозировать дальнейшее развитие заболевания.
Основные субпопуляции лимфоцитов:
Т-лимфоциты – лимфоциты, созревание которых происходит в тимусе. Они участвуют в обеспечении клеточного иммунного ответа и контролируют работу В-лимфоцитов, ответственных за образование антител, т. е. за гуморальный иммунный ответ.
Т-хелперы – разновидность Т-лимфоцитов, несут на своей поверхности структуры, способствующие распознаванию антигенов, презентированных вспомогательными клетками, участвуют в регуляции иммунного ответа, вырабатывая различные цитокины.
Цитотоксические Т-клетки — распознают фрагменты антигена на поверхности клеток-мишеней, ориентируют свои гранулы по направлению к мишени и высвобождают их содержимое в области контакта с ней. При этом некоторые цитокины являются сигналом гибели (по типу апоптоза) для клеток-мишеней.
В-лимфоциты — проходят развитие в лимфоузлах и других периферических органах лимфоидной системы. На поверхности эти клетки несут иммуноглобулины, функционирующие как рецепторы к антигенам. В ответ на взаимодействие с антигеном В-лимфоциты отвечают делением и дифференциацией в плазматические клетки, вырабатывающие антитела, посредством которых обеспечивается гуморальный иммунитет.
ЕК-клетки (естественные киллерные клетки, или натуральные киллеры) – клетки с естественной, неиммунной цитотоксической активностью к неопластически изменённым клеткам-мишеням. ЕК-клетки не относятся ни к зрелым Т- или В-лимфоцитам, ни к моноцитам.
Кластеры дифференциации антигенов:
CD3 – поверхностный маркёр, специфичный для всех клеток субпопуляции Т-лимфоцитов. По функциям относится к семейству белков, формирующих комплекс мембранной передачи сигнала, связанный с Т-клеточным рецептором.
CD4 – характерен для хелперных Т-клеток; представлен также на моноцитах, макрофагах, дендритных клетках. Он связывается с молекулами MHC класса II, экспрессированными на антигенпрезентирующих клетках, облегчая распознавание пептидных антигенов.
CD8 – характерен для супрессорных и/или цитотоксических Т-клеток, ЕК-клеток, большей части тимоцитов. Это рецептор Т-клеточной активации, который облегчает распознавание клеточно-связанных антигенов MHC класса I (major histocompatibility complex — главный комплекс гистосовместимости).
CD16 – используется вместе с CD56 преимущественно для идентификации ЕК-клеток. Представлен также на макрофагах, тучных клетках, нейтрофилах, некоторых Т-клетках. Это компонент рецепторов, связанных с IgG, опосредующих фагоцитоз, продукцию цитокинов и антителозависимую клеточную цитотоксичность.
CD56 – прототипный маркёр ЕК-клеток. Помимо ЕК-клеток присутствует на эмбриональных, мышечных, нервных, эпителиальных клетках, некоторых активированных Т-клетках. CD56-позитивны такие гематологические опухоли, как ЕК-клеточная или Т-клеточная лимфома, анапластическая крупноклеточная лимфома, плазмоклеточная миелома (плазмоклеточная лейкемия CD56-негативна). Это молекулы адгезии клеточной поверхности, которые облегчают гомофильную адгезию и участвуют в контактном ингибировании роста, ЕК-клеточной цитотоксичности, развитии нервных клеток.

Ранняя активация Т-клеток и Т-регуляторные лимфоциты (венозная кровь) в Городец

Комплексное лабораторное исследование направлено на подсчет абсолютного и относительного количества основных типов Т-лимфоцитов (Т-клеток) и оценку (активированного) Т-клеточного звена иммунной системы. Рекомендуется сдавать в комплексе с исследованиями иммунного статуса и/или клеточного иммунитета.

  • Об исследовании Обзор
  • Как подготовиться? Подготовка
  • Расшифровка Результат
  • Приём, исследование биоматериала
  • Показания к назначению
  • Описание

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Ранняя активация Т-клеток и Т-регуляторные лимфоциты?

Комплексная диагностика следующих состояний и патологий:

  1. Хронические инфекционные и/или аутоиммунные заболевания с тяжелым течением;
  2. Онкологические заболевания;
  3. Иммунодефициты различного происхождения (включая ВИЧ-инфекцию);
  4. Контроль эффективности лечения препаратами из группы иммуносупрессантов.

Подробное описание исследования

Иммунная система (иммунитет) способствует защите организма человека от различных воспалительных (инфекционных и неинфекционных), онкологических и других заболеваний. Лимфоциты являются представителями лейкоцитов, которые ответственны за специфический иммунитет — иммунную реакцию, целенаправленно действующую на конкретный чужеродный агент — антиген.

Данный комплексный анализ определяет общее количество Т-лимфоцитов (Т-клеток) и их основных субпопуляций, а также долю активированных Т-клеток от их общего числа.

В физиологических условиях все Т-лимфоциты последовательно проходят этапы созревания и постепенно становятся зрелыми клетками, которые могут участвовать в иммунных реакциях. При контакте зрелой Т-клетки с чужеродным антигеном происходит процесс активации: Т-лимфоцит превращается в тот тип, который необходим для иммунной защиты организма в данный момент.

Выделяют следующие типы (субпопуляции) Т-лимфоцитов:

  1. Цитотоксические (Т-киллеры);
  2. Хелперы;
  3. Регуляторные (Т-супрессоры).

Функцией цитотоксических Т-лимфоцитов является разрушение любых чужеродных молекул: микроорганизмов, токсинов, опухолевых клеток и др. Т-хелперы усиливают степень иммунной реакции и участвуют в активации других иммунных клеток (Т-киллеры, B-лимфоциты, моноциты). Т-регуляторные лимфоциты предотвращают чрезмерную иммунную реакцию и сдерживают активность Т-хелперов.

Все субпопуляции Т-клеток отличаются друг от друга набором маркеров CD (cluster of differentiation). Это хромосомные маркеры (антигены) дифференцировки, представленные в основном на поверхности Т-клеток. Каждый CD несет в себе не только опознавательную функцию, но и определенное биологическое значение. CD3-антиген (CD3+) представлен на всех зрелых Т-лимфоцитах, с помощью него можно определить абсолютное количество Т-клеток. CD4+ обнаруживается на Т-хелперах, CD8+ — на Т-киллерах.

Также есть антигены CD, которые указывают не на тип Т-клетки, а на её функциональное состояние — активирована она или нет. Их условно подразделяют на «ранние» и «поздние» CD активации. К ранним относят: CD69+, CD25+ и др.; к поздним: HLA-DR и др.

В рамках анализа оценивается общее число активированных Т-лимфоцитов с CD25+ и (отдельно) активированные Т-хелперы (CD3+CD4+CD25+) и Т-киллеры (CD3+CD8+CD25+).

Данное исследование является комплексным методом диагностики и, как правило, дополняет результаты теста иммунный статус (комплексное изучение состояния иммунной системы). Анализ может быть рекомендован для обследования пациентов с потенциальной иммунопатологической проблемой при следующих группах заболеваний:

  1. Инфекционные болезни любой локализации и любой природы (бактериальные, вирусные, грибковые, паразитарные);
  2. Аллергические патологии с тяжелым течением (бронхиальная астма, атопический дерматит, аллергический ринит и др.);
  3. Аутоиммунные нозологии (ревматические заболевания, аутоиммунный тиреоидит, воспалительные заболевания кишечника т др.);
  4. Злокачественные (преимущественно) и доброкачественные (реже) онкологические заболевания различного происхождения (кроветворной системы, внутренних органов, ассоциированных с иммунодефицитом и др.).

Состав комплекса «Ранняя активация Т-клеток и Т-регуляторные лимфоциты»:

  1. Т-лимфоциты;
  2. Т хелперы;
  3. Т-регуляторные клетки (CD4+CD25+CD127neg);
  4. Лейкоцитарная формула;
  5. Т-активированные клетки с маркером ранней активности (CD3+CD25+);
  6. Т- хелперы активированные с маркером ранней активности (CD3+CD4+CD25+);
  7. Т-цитотоксические активированные клетки (CD3+CD4-CD25+).